O objetivo desta fase do projeto será avaliar o efeito da substituição de cereais por polpa desidratada de citrinos (PDC) ou por cereais tratados com ácido tânico nas dietas para ruminantes nas condições do líquido ruminal e no perfil de ácidos gordos (AG) da bioidrogenação.

Será realizado um ensaio in vivo, utilizando cinco carneiros adultos com cânulas no rúmen do Laboratório de Digestibilidade de Ruminantes do Centro de Investigação da Fonte Boa.

Será seguido um delineamento em quadrado latino 5 x 5 (5 carneiros castrados x 5 dietas x 5 períodos experimentais). 

Os tratamentos incluídos no ensaio serão :

• controle que incluirá cevada como a fonte de alimentação de energia (C);
• cevada substituída em 50 % por PDC (T1);
• cevada substituída em 75 % por PDC (T2);
• cevada substituída em 100 % por PDC (T3);
• cevada tratada com ácido tânico de acordo com os resultados da Fase1 (T4).

As dietas serão preparadas no Centro de Investigação Boa Fonte. A PDC será adquirida no comércio. O tratamento da cevada com ácido tânico será realizado na Fonte Boa nas mesmas condições referidas na fase 1, sendo em seguida incluída na fórmula de concentrado com as outras matérias-primas.

As cinco dietas serão isoproteicas e isoenergéticas e incluirão 6% de óleo de soja.

As dietas serão atribuídas sequencialmente aos 5 carneiros nos 5 períodos.

Após 14 dias de adaptação, será considerado um período ensaio de 5 dias.

As dietas serão oferecidas numa base de 60 g / peso metabólico, correspondente a 1,5 x manutenção.

As dietas serão amostradas diariamente e as amostras compósitas, obtidas numa base semanal, serão utilizadas para determinar a composição química - matéria seca (MS), cinza, proteína bruta (PB), cálcio e fósforo; fibra em detergente neutro de acordo pelo método de Van Soest; amido; e gordura total (GT).

Os ésteres metílicos serão preparados como foi descrito por Francisco et al. (2015), utilizando ácido nonadecanóico como padrão interno. A composição AG será determinada por cromatografia gasosa (CG).

Nos dias 2 e 4 dos períodos de ensaio, 50 ml de líquido ruminal serão recolhidos em dois momentos diferentes: antes da distribuição do alimento e 3 horas após a distribuição do alimento. O pH será imediatamente determinado e o líquido ruminal será dividido em três frações equivalentes.

A primeira será imediatamente congelada e liofilizada e armazenada a -20 °C, antes de ser usada para a determinação dos ácidos gordos de cadeia longa. Para isso as amostras serão descongeladas e a preparação dos esteres metílicos dos AG será seguido o procedimento de trans-esterificação descrito por Alves et al. (2013).

A quantificação dos ésteres metílicos será feita por CG, usando ácido heneicosaenoico (C21:0) como padrão interno.

A segunda sub-amostra será filtrada por 4 camadas de gaze e centrifugada durante 10 minutos. O sobrenadante será armazenado a -20 °C, até à determinação dos ácido gordos voláteis (AGV). Este procedimento envolve o tratamento com ácido ortofosfórico e centrifugação. Os ácidos gordos voláteis serão quantificados por CG, utilizando as curvas de calibração para cada um dos ácidos.

A terceira sub-amostra será utilizada para a determinação do azoto amoniacal (NH3-N).

A responsabilidade deste ensaio será da total responsabilidade do INIAV.

Os resultados desta fase do projeto permitirão avaliar o impacto das manipulações da dieta no ambiente ruminal e no perfil de AG da bioidrogenação. Com os resultados das fases 1 e 2 teremos os elementos para estabelecer as dietas experimentais que serão utilizadas nos ensaios com ovinos e bovinos em crescimento.

Membros da equipa envolvidos nesta fase:

• INIAV - Alexandra Francisco; Teresa Dentinho; Olga Moreira;  Ana Paula Portugal; José Santos Silva
• FMV - Rui Bessa (colaboração)